產品簡介
本產品中的High Affinity HotStart Taq是TIANGEN Taq DNA Polymerase 和其單克隆抗體的混合制品,適用于HotStart PCR實驗。在PCR反應高溫加熱前,Taq單克隆抗體會與Taq酶結合,抑制其聚合酶活性。本產品中高親和力抗體可以保證在常溫條件下完全屏蔽Taq酶活性,使整個反應體系具有很高的特異性。另外,本產品中的Taq DNA Polymerase具有較高的模板親和力,可以提高擴增的效率以及特異性。10×HA Buffer是特別為該酶所優(yōu)化的PCR反應緩沖液,可以保證該酶的最佳性能。5×Probe qPCR Buffer是特別為探針法定量PCR用戶所優(yōu)化的反應添加劑,在實驗中配合10×HA Buffer使用,可使本產品用于探針法定量PCR反應中,從而使得本產品具有更加廣泛的應用范圍。另外,該試劑盒所產生的PCR產物3’末端為A,可直接用TA載體克隆。
試劑盒特點
1. 高親和體系:High Affinity HotStart Taq是特異性抗體修飾的熱啟動型DNA聚合酶,其抗體親和力高;同時Taq DNA Polymerase具有較高的模板親和力,具有穩(wěn)定的擴增效率,和高的特異性;該酶配合精心優(yōu)化的Buffer體系,使得PCR反應同時具有靈敏度高的優(yōu)點。
2. 穩(wěn)定性強:對于復雜模板,低拷貝模板的PCR反應以及多重PCR反應等普通DNA聚合酶無法完成的實驗,本產品都具有較高的反應成功率。
3. 應用廣泛:本產品不但適用于普通PCR分析,還適用于定量PCR分析。
儲存條件
收到本產品后,請立即置于-20℃保存。在-20℃條件下,本產品可保存1年。從-20℃取出使用時,將凍存的10 × HA Buffer和5 × Probe qPCR Buffer融解,然后輕輕顛倒混勻,待溶液完全均一后再行使用。如需一段時間內經常取用,可在2-8℃條件下儲存3個月,但要避免反復多次凍融。
注意事項
1.在進行普通PCR反應和染料法定量PCR反應時,不需要額外的加入5×Probe qPCR Buffer,只有在進行探針法定量PCR時才需要額外加入5×Probe qPCR Buffer。
2.在進行探針法定量PCR時,引物終濃度為250 nM,探針終濃度為200 nM可以在大多數體系中獲得良好的擴增結果。如果需要進一步優(yōu)化引物濃度的,可以在50-900 nM范圍內調整;需要進一步優(yōu)化探針濃度的,可以在100-500 nM范圍內調整。
工業(yè)客戶實驗例
建立染料法Real-Time PCR反應體系: 反應程序:
本實驗應用ET108配置的SYBR Green熒光定量試劑對人Hela細胞總RNA的GAPDH進行熒光定量結果,cDNA合成應用FastQuant RT Kit (KR106)試劑盒,cDNA用量相當于20 ng -2 pg的總RNA。