產(chǎn)品
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名稱描述內(nèi)容
產(chǎn)品詳情
商品描述
儲存條件 : -20℃ 單位 : 盒
胞漿蛋白提取試劑盒用于哺乳動物組織和細胞中提取胞質(zhì)蛋白，試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑，作用較為溫和，可獲得蛋白，可用于免疫印跡實驗等基礎(chǔ)研究實驗，由于含有上述的酶抑制劑，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品僅用于科研。
產(chǎn)品組成:
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規(guī)格 |
儲存條件 |
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裂解液 |
100 ml |
2-8 oC |
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磷酸酶抑制劑（100x） |
1ml |
-20 oC |
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蛋白酶抑制劑（100x） |
1 ml |
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PMSF（100x） |
1ml |
1、組織總蛋白的提取
在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF；混勻，放置在冰上備用；
稱取0.1g的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液，研磨直至沒有明顯的組織塊，這個過程注意冰上操作；
將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中，4 oC 12000g離心30min；
吸取上清至新的管中；
進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長時間儲存。)
2、細胞總蛋白的提取
裂解液的用量：107個細胞需要裂解液1ml；
貼壁細胞：棄去培養(yǎng)基，用冷的PBS洗兩次，棄去PBS，然后加入計算好的細胞裂解液；在冰上用細胞刮刀進行刮離細胞，
將刮離的細胞裂解液移入EP管中，顛倒裂解20-30min
懸浮細胞：4 oC 400g離心收集細胞，用冷的PBS洗兩次細胞，同樣按細胞數(shù)加入裂解液，
渦旋10s，放置冰上裂解10min，重復(fù)3-4次；
裂解完畢之后，將細胞裂解液4 oC 12000g離心30min；
將上清移入新的EP管中；
進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長時間儲存。)
注意事項：
實驗過程，所有試劑都要需要預(yù)冷或者即融，保證操作過程中的低溫環(huán)境；
PSMF（有毒）現(xiàn)用現(xiàn)加，因為PMSF在水溶液中會快速降解；
